藥物穩(wěn)定性研究的實(shí)驗(yàn)原理和注意事項(xiàng)

藥品的穩(wěn)定性是指其保持理化性質(zhì)和生物學(xué)特性不變的能力。若藥品的穩(wěn)定性差，發(fā)生降解而引起質(zhì)量變化，則不僅可能使藥效降低，而且生成的雜質(zhì)還有可能有明顯的毒副作用，影響藥品使用的安全性與有效性。

穩(wěn)定性試驗(yàn)的目的是考察原料藥或藥物制劑在溫度、濕度、光線的影響下隨時間變化的規(guī)律，為藥品的生產(chǎn)、包裝、貯存、運(yùn)輸條件提供科學(xué)依據(jù)，同時通過試驗(yàn)建立藥品的有效期，保證用藥安全。

一、穩(wěn)定性試驗(yàn)基本要求

要求1: 影響因素試驗(yàn)用1批供試品進(jìn)行（原料藥或制劑）。加速試驗(yàn)與長期試驗(yàn)要求用3批供試品進(jìn)行。

要求2: 原料藥供試品應(yīng)是達(dá)到一定規(guī)模生產(chǎn)的產(chǎn)品。供試品量相當(dāng)于制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)所要求的批量;原料藥合成工藝路線、方法、步驟應(yīng)與大生產(chǎn)一致。

要求3: 藥物制劑供試品應(yīng)是放大試驗(yàn)的產(chǎn)品，其處方和工藝與大生產(chǎn)一致。藥物制劑，如片劑或膠囊劑，每批放大試驗(yàn)的規(guī)模，至少應(yīng)為10000片或粒。大體積包裝的制劑，如靜脈注射液等，每批放大規(guī)模的數(shù)量至少應(yīng)為各項(xiàng)試驗(yàn)所需總量的10倍。特殊品種、特殊劑型所需數(shù)量，根據(jù)具體情況另定。

要求4: 供試品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)與臨床前研究及臨床試驗(yàn)和規(guī)模生產(chǎn)所使用的供試品質(zhì)童標(biāo)準(zhǔn)一致。

要求5: 加速試驗(yàn)與長期試驗(yàn)所用供試品的包裝應(yīng)與上市產(chǎn)品一致。原料藥所用包裝應(yīng)采用模擬小桶，但所用材料與封裝條件應(yīng)與大桶一致。實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的產(chǎn)品僅可用作輔助性穩(wěn)定性預(yù)試驗(yàn)。

要求6: 研究藥物穩(wěn)定性，要采用專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確、精密、靈敏的藥物分析方法與有關(guān)物質(zhì)(含降解產(chǎn)物及其他變化所生成的產(chǎn)物)的檢查方法，并對方法進(jìn)行驗(yàn)證，以保證藥物穩(wěn)定性結(jié)果的可靠性。在穩(wěn)定性試驗(yàn)中，應(yīng)重視有關(guān)物質(zhì)，特別是降解產(chǎn)物的檢查和鑒定。

要求7: 由于放大試驗(yàn)比規(guī)模生產(chǎn)的數(shù)量要小，故藥品注冊申請人應(yīng)在獲得批準(zhǔn)后，從放大試驗(yàn)轉(zhuǎn)人規(guī)模生產(chǎn)時，對最初通過生產(chǎn)驗(yàn)證的3批規(guī)模生產(chǎn)的產(chǎn)品仍需進(jìn)行加速與長期穩(wěn)定性試驗(yàn)。

二、原料藥物與藥物制劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)

1、原料藥物

（1）影響因素試驗(yàn)

影響因素試驗(yàn)是將藥品置于比加速試驗(yàn)更為劇烈的條件下進(jìn)行的穩(wěn)定性考察。其目的是探討藥物的固有穩(wěn)定性，了解影響其穩(wěn)定性的因素及可能的降解途徑與降解產(chǎn)物，為制劑生產(chǎn)工藝、包裝，、貯存條件和建立降解產(chǎn)物分析方法提供科學(xué)依據(jù)。當(dāng)試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)降解產(chǎn)物有明顯的變化，應(yīng)考慮其潛在的危害性，必要時應(yīng)對降解產(chǎn)物進(jìn)行定性或定量分析，匯智泰康可提供降解產(chǎn)物推斷與含量檢測服務(wù)。

(2）加速試驗(yàn)

此項(xiàng)試驗(yàn)是在加速條件下進(jìn)行。其目的是通過加速藥物的化學(xué)或物理變化，探討藥物的穩(wěn)定性，為制劑設(shè)計(jì)、包裝、運(yùn)輸、貯存提供必要的資料。

(3）長期試驗(yàn)

長期試驗(yàn)是將藥物置于接近實(shí)際貯存的條件下進(jìn)行的穩(wěn)定性考察，目的是為制訂藥物的有效期提供依據(jù)。

2、藥物制劑

藥物制劑穩(wěn)定性研究，首先應(yīng)查閱原料藥物穩(wěn)定性有關(guān)資料，特別了解溫度、濕度、光線對原料藥物穩(wěn)定性的影響，并在處方篩選與工藝設(shè)計(jì)過程中，根據(jù)主藥與輔料性質(zhì)，參考原料藥物的試驗(yàn)方法，進(jìn)行影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)與長期試驗(yàn)。

（1）影響因素試驗(yàn)

藥物制劑進(jìn)行此項(xiàng)試驗(yàn)的目的是考察制劑處方的合理性與生產(chǎn)工藝及包裝條件。

（2）加速試驗(yàn)

此項(xiàng)試驗(yàn)是在加速條件下進(jìn)行，其目的是通過加速藥物制劑的化學(xué)或物理變化，探討藥物制劑的穩(wěn)定性，為處方設(shè)計(jì)、工藝改進(jìn)、質(zhì)量研究、包裝改進(jìn)、運(yùn)輸、貯存提供必要的資料。

（3）長期試驗(yàn)

長期試驗(yàn)是在接近藥品的實(shí)際貯存條件下進(jìn)行，其目的是為制訂藥品的有效期提供依據(jù)。

三、穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目

原料藥物及主要劑型的重點(diǎn)考察項(xiàng)目見附表，表中未列人的考察項(xiàng)目及劑型，可根據(jù)劑型及品種的特點(diǎn)制訂。

注：有關(guān)物質(zhì)（含降解產(chǎn)物及其他變化所生成的產(chǎn)物）應(yīng)說明其生成產(chǎn)物的數(shù)目及量的變化，如有可能應(yīng)說明有關(guān)物質(zhì)中何者為原料中的中間體，何者為降解產(chǎn)物，穩(wěn)定性試驗(yàn)重點(diǎn)考察降解產(chǎn)物。

四：穩(wěn)定性試驗(yàn)的分析方法與要求

適用于藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品質(zhì)量檢測的分析方法稱為穩(wěn)定性指示分析法。穩(wěn)定性指示分析法應(yīng)該能夠準(zhǔn)確檢測出藥物原料和制劑的質(zhì)量隨著穩(wěn)定性試驗(yàn)考察因素的作用和時間的延長而可能出現(xiàn)的變化。穩(wěn)定性指示分析法應(yīng)能夠不受降解產(chǎn)物、工藝雜質(zhì)、賦形劑或其他潛在雜質(zhì)的影響，而準(zhǔn)確測定藥物中的活性成分，并能夠定性和（或）定量地監(jiān)測藥物中的雜質(zhì)（包括降解產(chǎn)物）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)中所用的含量測定方法應(yīng)當(dāng)具備穩(wěn)定性指示能力。如果所用含量測定方法的專屬性不能滿足穩(wěn)定性試驗(yàn)的要求，則必須增加能夠進(jìn)行雜質(zhì)(包括降解產(chǎn)物)定性和定量監(jiān)測的分析方法對其進(jìn)行補(bǔ)充。所以，常用的穩(wěn)定性指示分析法主要是色譜分析法，如PLC，HPTLC等。穩(wěn)定性指示分析法建立時，為了保障其適用性，通常均要求在試驗(yàn)樣品的制備、分析條件的建立和試驗(yàn)方法的驗(yàn)證3個方面進(jìn)行全面的試驗(yàn)研究。

1、試驗(yàn)樣品的制備

試驗(yàn)樣品包括：起始原料、中間體，粗品原料、藥物成品，以及將藥物經(jīng)過破壞（苛性）處理使主成分含量下降約5%~20%而包含分降解產(chǎn)物的樣品。對于復(fù)方制劑，則需要對各藥效成分既分別又合并進(jìn)行破壞處理。

常用的破壞處理方法是將藥物固體和（或）其適宜的溶液置于比加速和影響因素試驗(yàn)更為劇烈的條件下進(jìn)行破壞，生成分降解產(chǎn)物。這樣既可以滿足考察穩(wěn)定性指示分析法適用性的需要，又可以建立藥物的分降解行為與途徑，鑒定可能的分降解產(chǎn)物，并獲得藥物的內(nèi)在穩(wěn)定性特征。

從而為預(yù)測藥物在貯藏過程中可能出現(xiàn)的分降解產(chǎn)物，并為藥物的生產(chǎn)制備工藝、制劑處方工藝、包裝與貯藏等條件的優(yōu)化與建立提供參考。

藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，理化性質(zhì)有差異，其分降解行為也常常不同。水解、氧化、異構(gòu)化或聚合等，是藥物分降解的主要途徑，并有可能出現(xiàn)多途徑降解。所以，常用的破壞處理方法包括水解、氧化、高溫和光照等。當(dāng)藥物在通常的溶劑條件下的溶解度不合適時，還可以添加適宜的有機(jī)溶劑助溶，以便有效地產(chǎn)生分降解反應(yīng)。

破壞處理時，需同時制備:空白溶劑或輔料、平行破壞處理的空白溶劑或輔料、未經(jīng)破壞處理的樣品、平行破壞處理的單組分樣品，以便識別和鑒定分降解產(chǎn)物及其來源。并可適當(dāng)增減調(diào)整破壞處理的程度，以便獲得破壞程度適宜的降解樣品。對于具有手性、多晶型或順反異構(gòu)的藥物，還須特別考察破壞處理過程中的手性、晶型或異構(gòu)的轉(zhuǎn)化。

2、分析方法的建立

常用的穩(wěn)定性指示分析法均為具有良好分離能力和專屬性的色譜方法。為了檢驗(yàn)穩(wěn)定性指示分析法的專屬性和適用性，應(yīng)采用起始原料、中間體、粗品原料及藥物經(jīng)過破壞處理生成分降解產(chǎn)物的樣品，進(jìn)行分離效能的考察，確保所使用的方法滿足藥物中活性成分的專屬與準(zhǔn)確測定要求，滿足有關(guān)物質(zhì)的定性和（或）定量檢査的要求。

所以，在穩(wěn)定性指示色譜測定條件的建立過程中，必須對主成分峰以及需要逐一進(jìn)行定量測定的所有特定雜質(zhì)峰，分別采用適宜的手段進(jìn)行專屬性的確證。專屬性確證常用的方法包括：色譜峰純度PDA或MS鑒定的直接檢查法；改變色謂條件或色譜系統(tǒng)，考察和比較色譜峰分離的間接檢查法；以及添加雜質(zhì)對照的驗(yàn)證檢查法。

由于分降解產(chǎn)物與藥物活性成分常常具有明顯的理化和色譜行為差異，所以，在藥物雜質(zhì)檢查和穩(wěn)定性指示分析測定中，梯度HPLC 的使用巳變得越來越廣泛。例如，ChP中阿司匹林的有關(guān)物質(zhì)檢查，自ChP2010即采用了梯度HPLC，而在ChP2005相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)中，除游離水楊酸外，沒有進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的檢查。

當(dāng)然，穩(wěn)定性指示分析法并不一定要使破壞產(chǎn)生的所有分降解產(chǎn)物均能夠獲得專屬的分離。尤其是那些已經(jīng)證明在加速和長期穩(wěn)定性試驗(yàn)中不可能產(chǎn)生的雜質(zhì)，在穩(wěn)定性指示分析法建立時，可以不予考慮。

匯智泰康分析方法建立步驟：

• 1）了解樣品的性質(zhì)-化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、分子量、PKa值、溶解度等；
• 2）確定定性還是定量—涉及標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備（若是定量，需提前準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)品）
• 3）樣品的預(yù)處理：根據(jù)來源形式不同，可能有如下幾種形式①可直接進(jìn)樣；②需稀釋或加入內(nèi)標(biāo)等其他操作；③需要溶解或提取處理的固體。
• 4）上機(jī)檢測

3、試驗(yàn)方法的驗(yàn)證

匯智泰康可根據(jù)穩(wěn)定性指示分析法的類型不同，分別對方法的專屬性、線性和范圍、精密度、準(zhǔn)確度、靈敏度和耐用性等進(jìn)行必要的驗(yàn)證，結(jié)果應(yīng)與選用方法的類型相適宜。

參考材料：

1、原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則

2、藥品注冊管理辦法（局令第28號）附件二