關(guān)鍵詞：Hamster; Primary Hepatocytes; LVG; Metabolism stability; Metabolic studies; Suspension hepatocytes; Plateable hepatocytes

肝臟（liver）是藥物代謝的重要器官，體外代謝模型多以肝臟為基礎(chǔ)。常用的體外模型有肝微粒體(liver microsomes)、肝S9(liver S9)、肝胞質(zhì)液(liver cytosol)及原代肝細(xì)胞(Primary hepatocytes)等。其中，原代肝細(xì)胞（Primary hepatocytes）因具有較好的體外試驗(yàn)重現(xiàn)性，基本維持了肝臟的代謝功能，特別是較好的保留了與體內(nèi)一致的酶水平，成為了體外藥物試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)"，廣泛應(yīng)用于藥物代謝與毒理學(xué)研究中。

一、懸浮原代肝細(xì)胞的應(yīng)用

【原代肝細(xì)胞的特點(diǎn)】

原代肝細(xì)胞(Primary hepatocytes)是指從動(dòng)物肝臟直接分離的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞。原代肝細(xì)胞作為一種體外模型，具有其它體外模型不可替代的優(yōu)點(diǎn)：

①與體內(nèi)環(huán)境保持一致，酶量和輔助因子水平都是正常的生理濃度，可以在接近生理狀態(tài)的的情況下研究藥物的代謝和毒性；

②較好保留和維持了肝細(xì)胞的完整形態(tài)和肝細(xì)胞體外代謝活性，真實(shí)反應(yīng)了體內(nèi)的代謝情況；

③無(wú)須擔(dān)心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的倫理問(wèn)題，亦可減少動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所需要的的成本開(kāi)支，實(shí)現(xiàn)了減少（Reduction）、替代（Replacement）、優(yōu)化（Refinement）的 3R 倫理原則。

肝細(xì)胞被分離后，可進(jìn)行貼壁（Plateable）培養(yǎng)和懸浮(Suspension)培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞在最開(kāi)始的4h內(nèi)細(xì)胞色素P450酶的活性最為和體內(nèi)一致，隨時(shí)間的延長(zhǎng)而迅速下降；貼壁培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞有足夠的時(shí)間從損傷中恢復(fù)過(guò)來(lái)，具有正常細(xì)胞的形態(tài)特征。隨著3D培養(yǎng)技術(shù)的出現(xiàn)，原代肝細(xì)胞的應(yīng)用范圍也進(jìn)一步得到了擴(kuò)展。

【原代肝細(xì)胞的分離】

常見(jiàn)的原代肝細(xì)胞分離有直接剪切法、組織塊培養(yǎng)法、胰蛋白酶消化法、兩步膠原酶灌注法（seglen灌注法）和半原位膠原酶灌注法。其中，IPHASE采用的兩步膠原酶灌注法是用含有膠原酶的溶液通過(guò)門(mén)靜脈灌注到肝臟中，使肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞與間質(zhì)分開(kāi)，然后收集分離得到肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞，因此對(duì)肝臟細(xì)胞損傷較小，進(jìn)而肝細(xì)胞產(chǎn)量和活率均較高，從而成為了分離原代肝細(xì)胞的經(jīng)典方法。

【懸浮原代肝細(xì)胞的應(yīng)用】

懸浮培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞在最開(kāi)始的4h內(nèi)細(xì)胞色素P450酶的活性最為和體內(nèi)一致，隨時(shí)間的延長(zhǎng)而迅速下降，其活性限制的特性使得其與貼壁肝細(xì)胞具有不同的應(yīng)用方向。

懸浮原代肝細(xì)胞在藥物代謝中的應(yīng)用

原代肝細(xì)胞作為藥物代謝研究的經(jīng)典模型，在探討藥物在肝中的代謝途徑和藥代動(dòng)力學(xué)的研究中發(fā)揮著重要作用。將苗頭化合物與懸浮原代肝細(xì)胞（Suspension primary hepatocytes）共孵育，不但可對(duì)化合物在肝細(xì)胞中的代謝穩(wěn)定性進(jìn)行研究，而且還可得到相對(duì)多量的高純度的代謝產(chǎn)物，在研究藥物生物轉(zhuǎn)化特征，尋找藥物可能的代謝物方面優(yōu)勢(shì)顯著。尤其是當(dāng)有證據(jù)顯示化合物的生物轉(zhuǎn)化途徑為二相代謝、水解作用或肝微粒體中非特異性蛋白結(jié)合很高、肝微粒體中代謝不明顯的時(shí)候，原代肝細(xì)胞更為不可替代的體外模型。

懸浮肝細(xì)胞在毒性測(cè)試中的應(yīng)用

懸浮肝細(xì)胞(Suspension hepatocytes)在毒性測(cè)試中具有重要應(yīng)用價(jià)值，能夠?yàn)樗幬镩_(kāi)發(fā)、化學(xué)品安全性評(píng)估及毒性機(jī)制研究提供可靠的工具。懸浮肝細(xì)胞(Suspension hepatocytes)對(duì)毒性物質(zhì)反應(yīng)靈敏，能夠檢測(cè)到低濃度的毒性效應(yīng)，且其可以同時(shí)評(píng)估多種毒性指標(biāo)（如細(xì)胞活力、膜完整性、代謝功能等），即可提供更全面的毒性信息。因此，常用懸浮肝細(xì)胞①測(cè)試藥物對(duì)肝細(xì)胞的直接毒性，預(yù)測(cè)其對(duì)人體肝臟的潛在危害；評(píng)估藥物代謝產(chǎn)物是否具有肝毒性；②肝毒性機(jī)制研究：研究毒性物質(zhì)導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷的分子機(jī)制（如氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙、細(xì)胞凋亡等）；探索毒性物質(zhì)對(duì)肝細(xì)胞代謝功能的影響；也可利用懸浮肝細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模藥物或化學(xué)物質(zhì)的毒性篩選，快速識(shí)別潛在物質(zhì)。因此，懸浮肝細(xì)胞在毒性測(cè)試中具有重要意義。

懸浮肝細(xì)胞在疾病模型構(gòu)建中的應(yīng)用

懸浮肝細(xì)胞在疾病模型構(gòu)建中具有重要應(yīng)用，能夠模擬多種肝臟疾病的病理生理過(guò)程，為疾病機(jī)制研究和新療法開(kāi)發(fā)提供有力工具。目前已知的疾病模型有-病毒性肝炎模型、非酒精性脂肪肝?。∟AFLD）模型、酒精性肝病模型、肝纖維化和肝硬化模型、肝癌模型及遺傳性肝病模型等。懸浮原代肝細(xì)胞具有高度模擬體內(nèi)環(huán)境、高通量篩選能力及個(gè)性化醫(yī)療潛力等不可替代的優(yōu)勢(shì)，使其成為肝臟疾病研究領(lǐng)域不-可或-缺的模型系統(tǒng)。因此，通過(guò)懸浮肝細(xì)胞疾病模型，可以加速藥物開(kāi)發(fā)和疾病治療的進(jìn)展，進(jìn)一步推動(dòng)精準(zhǔn)醫(yī)療的實(shí)現(xiàn)！

二、金黃地鼠懸浮肝細(xì)胞的重要性

金黃地鼠（Hamster）是嚙齒目鼠科倉(cāng)鼠屬哺乳動(dòng)物，又稱(chēng)敘利亞地鼠。其形態(tài)尾粗短；耳色深呈圓形，眼小而亮；被毛柔軟；脊背為鮮明的淡金紅色，腹部與頭側(cè)部為白色；由于突變，毛色和眼的顏色產(chǎn)生諸多變異，可有野生色、褐色、乳酪色、白色、黃棕色等，眼亦有紅色和粉紅色；平均壽命2.5-3年。廣泛分布于歐亞大陸，目前已遍及世界各國(guó)。 晝伏夜行，夜晚十分活躍，有嗜眠習(xí)慣。其對(duì)室溫變化敏感，以22-25攝氏度為宜。性情兇猛好斗，?；ハ嗨捍颉Ｊ承詮V泛，以植物性食物為主。性成熟早，雌鼠每隔5天左右發(fā)情1次。生殖周期為15天左右。每年5-7胎，每胎產(chǎn)仔約7只。妊娠期為15-17天，哺乳期為21天。

金黃地鼠(Hamster)廣泛用于流行病學(xué)、微生物學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)、老齡化研究、行為學(xué)研究等醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域中；在生物制品方面常用作狂犬疫苗、乙型腦炎疫苗的檢定用動(dòng)物；腎臟 細(xì)胞還可為多種病毒（如腦炎病毒、流感感毒、腺病毒等）、立克次氏體及原蟲(chóng)的分離、繁殖、傳代、保種等；對(duì)病毒十分敏感，目前已成為病毒研究和實(shí)驗(yàn)的主要?jiǎng)游?，廣泛用于毒性和致畸的研究領(lǐng)域中。

因此，IPHASE作為體外生物試劑引-領(lǐng)者，基于金黃地鼠在生物醫(yī)學(xué)研究中不-可或-缺的重要性，研發(fā)生產(chǎn)了國(guó)內(nèi)-首-家金黃地鼠懸浮原代肝細(xì)胞，為生物醫(yī)學(xué)研究提供更多的試驗(yàn)動(dòng)物選擇，為研究疾病發(fā)展保駕護(hù)航！

IPHASE采用兩步膠原酶灌注法（seglen灌注法）生產(chǎn)金黃地鼠懸浮原代肝細(xì)胞，為驗(yàn)證肝細(xì)胞活性，技術(shù)人員以1支批號(hào)為23K018的金黃地鼠懸浮原代肝細(xì)胞為試驗(yàn)材料，經(jīng)0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色，確認(rèn)其活率＞90%，并進(jìn)一步以終濃度為500µM的7-乙氧基香-豆素作底物，同1×10^6金黃地鼠懸浮肝細(xì)胞于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中共同孵育30min，得到產(chǎn)物7-羥基香-豆素的生成速率是583.8±9.4 (pmol/million cells/min)，并以此作為細(xì)胞色素P450（CytochromeP450）酶的活性反應(yīng)代表，這一過(guò)程充分說(shuō)明了IPHASE金黃地鼠懸浮原代肝細(xì)胞研發(fā)、生產(chǎn)成功！

三、IPHASE相關(guān)產(chǎn)品

除金黃地鼠懸浮肝細(xì)胞外，IPHASE為滿足不同客戶的不同需求，研發(fā)生產(chǎn)力多種屬、多品系的懸浮/貼壁原代肝細(xì)胞，力求滿足不同領(lǐng)域客戶的不同需求，真正做到“一站式"產(chǎn)品服務(wù)供應(yīng)商！

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，推出了多領(lǐng)域、多種類(lèi)的高-端科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品，望廣大科研工作者咨詢。

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